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免疫印迹技術簡介

免疫印迹技術(immuohlotting )是生物大分子印迹術中的一種。 1975 年，Southern 将酶切的 DNA片段用瓊脂糖凝膠電泳分離，再借助毛細管作用将凝膠上的區帶轉移吸附于硝酸纖維素 (NC) 膜上，膜上的 DNA 片段與特定的放射性同位素标記的cDNA探針雜交，通過放射自顯影檢出待測的 DNA片段。此技術即 DNA 印迹術，當時稱為 Southernblotting。 1977年Alwine等對此法改良，将不能有效地結合于NC膜上的RNA和小片段DNA共價交聯于偶氮次苄基羟甲基紙上，該技術被稱為RNA印迹。由于Southern EM的姓Southern 含有南部之意，故有人戲稱RNA印迹術為northern blotting (北部印迹術)。1981 年Bernette 等建立蛋白質印迹術，即将在十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離的蛋白質轉移到NC膜上進行分析，此技術被人稱為西部印迹術(western blotting) ；而1982年，Reinhart等建立的電聚焦後的蛋白質印迹術即稱為東部印迹術(eastern blotting) 因此，除Southern 印迹術取名于作者之姓外，其他印迹術之名均為杜撰，不僅不能反映各種印迹術的本質特征，更在名稱上造成混亂。對此應予規範，按其用途稱為 DNA 印迹、 RNA 印迹和蛋白質印迹。

【原理】

免疫印迹術是建立在蛋白質印迹基礎之上的。含多種蛋白質成分的生物液體經 SDS-PAGE 分離，在凝膠闆上依相對分子質量的大小形成位置不同的區帶。然後用電轉印或其他轉印方法将凝膠闆分離的蛋白質轉印至 NC 膜或其他材料的膜上，再依次用特異性抗體(一抗)和酶(辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶)或放射性同位素、膠體金标記的抗抗體(二抗)與膜上蛋白質反應進行抗原或抗體的特異性分析。

免疫斑點法是免疫印迹法的一種改進方法。将多種親和層析純化的、生化性質明确的核抗原平行包被到膜條上作為固相，可用于Sm、SS-A 、SS-B、Scl-70、Jo-l、核糖體P蛋白、組蛋白和核小體等抗體的定性檢測。在第一次溫育時，己稀釋的患者血清與膜條上的抗原反應，特異性自身抗體與相應抗原結合，加入酶标記抗人IgG(酶結合物)進行第二次溫育，然後加入底物/色原溶液呈色。此法所用抗原有别于免疫印迹法，為純化抗原，各抗原帶在膜上的位置固定，且膜條上無雜蛋白，不會産生非特異性反應，結果判斷比免疫印迹法更簡單。